免疫熒光染色注意事項

免疫熒光染色是比較常見的一項病理染色服務，做免疫熒光染色時我們應該注意以下幾點：

(1) 陝西依科生物提示：由於熒光容易淬滅，一般僅能維持幾個小時，因此，熒光二抗應避光保存，即從加入熒光二抗以後的步驟中都要盡量避光操作。封片後應盡早照相，目前有市售的熒光增強劑，可使熒光在4℃保存1-2周仍不淬滅。

(2) 常用的熒光素有以下幾種，綠色熒光：FITC、 Alexa Fluor 488和GFP；紅色熒光：TRITC、Cy3、Alexa Fluor 568&594和MitoTrackerRed；藍色熒光：Hoechst、DAPI；黃色熒光：YFP、Fluo-3和Rhoda-minel23等。

(3）不同的熒光素激發的波長不同，因此，選用濾光片時要注意。一般紫外線的激發波長為334-365nm，藍光的激發波長為435-490nm，綠光的激發波長為546nm左右。

(4) 熒光顯微鏡應提前至少15min打開汞燈預熱。關閉30min後方可再開啟。

(5）免疫熒光的組織要求很高，載玻片及蓋玻片要幹淨無雜質。進行熒光染色時，需注意染液的pH、濃度和染色溫度，還要避免對熒光有熄滅作用的物質的接觸。組織和細胞也有自發熒光，如紅細胞中的血紅蛋白呈紅色熒光，維生素A呈綠色自發性熒光等。