免疫熒光染色正確操作方法

免疫熒光染色是病理染色服務中比較常見的一種染色方法，陝西依科生物多年行業經驗向大家分享免疫熒光染色正確操作方法。

操作方案要優化

免疫熒光染色的操作方案通常包括：固定和透化、封閉、一抗孵育、洗滌、二抗孵育、再次洗滌以及測定讀數。陝西依科生物建議研究人員在使用珍貴的樣本材料時，花點時間優化操作方案的每一步。就一抗孵育而言，你必須考慮抗體的建議稀釋度，以實現高的信背比。若抗體濃度過低，則熒光信號較弱，可能難以與背景區分開，但抗體濃度過高，則會導致較高的背景染色。同時千萬不要低估各步驟之間徹底洗滌的重要性。利用生理溶液來洗滌，可去除未結合的熒光試劑，或那些隻是粘在目標上而非特異性結合的熒光試劑，從而提高信背比。

熒光試劑要放好

盡管許多熒光基團具有相對的光穩定性，但在保存和染色過程中若未能避光，則可能導致熒光基團-抗體結合物降解，引起假陰性結果。陝西依科生物強調，熒光物質必須在建議溫度下小心保存，並始終注意避光，以保護其光譜完整性。特別指出，串聯的熒光基團對頻繁操作引起的不穩定性特別敏感。盡管免疫熒光技術提供了準確的結果，但也存在一些缺點，包括自發熒光、熒光信號的淬滅，以及標本存儲過程中的信號褪色。按照建議的實驗方案來操作，研究人員可以避免一些技術上的缺陷。

選擇熒光要謹慎

免疫熒光技術的一個主要優勢在於它為多重檢測提供了機會，如今流式細胞儀能檢測每個細胞中20多個離散參數。在設計多重實驗時，應考慮每種熒光基團的獨特性質，如較大吸收波長和較大發射波長，消光係數和斯托克斯位移等因素。研究發現，人們通常要檢測組織或細胞樣本中的多個抗原，必須選擇光譜不重疊的熒光基團。即使是較好的檢測係統，也無法克服儀器和試劑之間的不匹配。

合適對照不可少

任何實驗數據的分析都依賴於相關的對照，免疫熒光染色也不例外。“不加一抗，則能說明觀察到的信號是否來源於二抗與組織或細胞樣本的非特異性結合，”“此外，我們建議使用不表達目標的細胞或組織作為陰性對照。同時，為了確保所有組分都正常發揮作用，那些已知表達目標的陽性對照也少不了。在熒光Western blot或ELISA技術中，含有目標抗原的蛋白或肽段適合作為陽性對照。”

總之，免疫熒光染色是一種流行且強大的檢測方法。通過精心選擇熒光基團，並開發可靠的染色方案，你可以生成豐富的數據。陝西依科生物提供了優質的抗體和試劑，有興趣的可來電谘詢我們。