腦組織實驗前處理方法及常做的染色

灌注取材

灌注的必要性：

①腦組織較軟，且細胞成分不易保留，腦組織是較易軟化的組織之一，血供也較為豐富，所以最好是在取腦組織前用4%多聚甲醛灌注固定；

②經前固定後，取腦操作時，可減少腦組織損傷；

③腦內血液豐富，經灌注後，可去除紅細胞。

灌注方法：心髒灌注法和夾閉腹主動脈灌注法

心髒灌注原理：心髒灌注術能夠快速衝淨血液並在動物死亡前進行組織的前固定，避免了組織的自溶現象，是腦組織切片觀察的常用方法。

心髒灌注方法：先把動物麻醉沿胸骨柄剪開胸腔，剪開心包膜，暴露心髒，與心尖呈30-45°夾角剪開左心室，再剪開右心耳，將灌注針從左心室插入主動脈，固定針頭，然後快速用生理鹽水（大鼠100-150ml）衝洗血液，至流出液體血色較淺基本澄清（肝髒、眼珠、爪子迅速變白是排除血液的有效觀察標誌），再先快後慢注入4%多聚甲醛250ml（大鼠）固定，先後所需50min，多聚甲醛進入大鼠體內，大鼠會出現四肢、尾的抽搐，最終以肝髒發白、內髒鼓起即灌注好。然後取材，取完後的腦組織再放置4%多聚甲醛中4度冰箱進行後固定，時間大於2小時，最好過夜。

省時省劑的灌注方法

夾閉腹主動脈：隻灌注上肢及頭腦，固定的好又快，又節省試劑。先灌注生理鹽水約100ml（大鼠），見到老鼠兩前肢及兩肺變白即可改灌注多聚甲醛，多聚甲醛100ml以下即可。

灌注成功的標誌：剛開始灌注時老鼠前肢劇烈抽動（下肢不抽動證明腹主動脈夾閉完全）；前肢及頸部僵硬；所灌注的腦組織白而硬。

位置要求：常切的位置有前額葉皮層、紋狀體、海馬、下丘腦、黑質、小腦

包埋切片：

①如做冰凍切片，先蔗糖脫水，待組織沉底，即可做OCT包埋切片，切片-20℃保存；

②如做石蠟切片，酒精脫水，二甲苯透明，欧宝环球aoa体育平台 、切片，切片常溫保存，如果後期做免疫實驗，封蠟4℃保存；

染色：

腦組織常做的染色及指標：HE、尼氏、LFB 、GFAP、iba-1、NEUN、TH、c-fos。