LFB(髓鞘）染色方法及注意事項

LFB(髓鞘）染色方法及注意事項由陝西依科生物為您解答：

一、實驗方法原理

勞克堅牢藍(LuxolFastBlue,LFB)屬於銅－酞箐染料，在酒精溶液中具有與髓鞘磷脂結合的染色特性。應用LFB髓鞘染色可以很好地顯示出神經組織的髓鞘結構。

二、實驗步驟

1.石蠟切片脫蠟至水：依次將切片放入二甲苯Ⅰ8min-二甲苯Ⅱ8min-無水乙醇Ⅰ 6min-無水乙醇Ⅱ6min-95%酒精 6min-85%酒精 6min-75%酒精 5min-流水衝洗；

2.切片經蒸餾水清洗後，入0.1% LFB溶液，於60℃密封浸染8-16h；

3.經蒸餾水清洗後，入95%酒精；

4.以0.05%碳酸鋰水溶液分色10s以上；

5.經70%酒精繼續分色，直至顯微鏡下觀察灰、白質區分清晰為止；

6.蒸餾水洗片後，蘇木精-伊紅複染；

7.70%酒精將複染顏色分至細胞核及尼氏體呈紅色；

8.濾紙沾盡多餘液體，入正丁醇2次漂洗脫水，每次脫水時間3-5min；

9. 二甲苯透明，中性樹膠封片。

三、染色結果判讀：髓鞘呈鮮藍色，背景呈紅色。

四、注意事項

(1)切片若為石蠟切片，要在二甲苯中先脫蠟，再至無水乙醇。

(2)0.05%碳酸鋰水溶液分色應該在顯微鏡下進行，至背景呈灰色為止。70%酒精再次分色時，至背景無色為止。

其他

(1)LFB染色完後，可用焦油紫溶液或蘇木素－伊紅複染，這樣能更好地顯示出細胞的形態。

(2)複染之後要入正丁醇漂洗脫水，這樣染色效果更佳。

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