TRAP染色實驗步驟

一、實驗原理

酸性磷酸酶(acid phosphatase,ACP)分布極廣泛，遍布各種組織，主要存在於細胞的溶酶體內，所以常作為溶酶體標誌酶。溶酶體外的酸性磷酸酶存在於內質網和胞質內。各種動物中的酸性磷酸酶各有不同， 酸性磷酸酶的適宜pH 為4.5-5.5。存在於正常人肺泡巨噬細胞和白血病人脾髒的抗酒石酸酸性磷酸酶 (Tartrate-resistnt acid phosphatase,TRAP)均在細胞濾泡中，並不是釋放入血液。血液中的TRAP 絕大多數 來源於破骨細胞，因此可以通過測量血液中的TRAP 了解破骨細胞的功能狀態。

抗酒石酸酸性磷酸酶染色以萘酚AS-BI為底物，在酸性pH下被酸性磷酸酶水解釋放出磷酸和萘酚，萘酚與重氮鹽偶聯生成有色產物，定位於細胞質中，若細胞內的ACP 有抗酒石酸的活性，則呈陽性反應。

二、TRAP染色實驗步驟

1.石蠟切片脫蠟至水：依次將切片放入二甲苯Ⅰ8min-二甲苯Ⅱ8min-無水乙醇Ⅰ 6min-無水乙醇Ⅱ6min-95%酒精 6min-85%酒精 6min-75%酒精 5min-流水衝洗；

2.自然晾幹， TRAP 固定液2-8℃固定30s-3min, 多數情況下30-60s即可；

3.水洗，稍微晾幹(不宜過分幹燥)。

4.切片入TRAP 孵育液，置於37℃溫箱，浸染45-60min,水洗。

5.複染：蘇木素染色液染色5-8min，分化液分化3-5s 。

6. 水洗、脫水、透明、中性樹膠封片。

三、染色結果判讀：陽性顆粒呈紫紅色，細胞核呈藍色或綠色。

臨床意義：

1、 毛細胞白血病的毛細胞ACP 染色呈強陽性或中度陽性，且不被酒石酸抑製，其他細胞均呈陰性或極 弱陽性。

2、 急性白血病幼單核細胞ACP 染色呈陽性，原淋巴細胞呈弱陽性，原粒細胞對ACP 反應不一。

3、T 淋巴細胞 ACP 染色呈陽性，顆粒粗大、分布密集。 B 淋巴細胞呈陰性或顆粒細小的弱陽性。

4、 戈謝細胞呈強陽性，尼曼-皮克細胞呈陰性或弱陽性。

注意事項：

1、TRAP孵育液易失效，本法宜用皮膚穿刺血塗片，晾幹後應及時染色

2、 對冰凍切片染色時，應減少切片在室溫暴露的時間。

3、 樣本需新鮮，取材後應立即處理，否則會影響酶的活性。

4、 組織固定需在2-8℃冰箱進行，時間不宜超過24h, 否則酶活性會減弱或消失。

5、 組織在欧宝环球aoa体育平台 時，溫度不宜高於56℃。應使用熔點為52-52-8℃的石蠟進行浸蠟，浸蠟時間要短， 否則酶活性會減弱或消失。

6、 不純的二甲苯會分解黑色沉澱，宜選用AR 級以上的二甲苯。

7、 為了您的安全和健康，請穿實驗服並戴一次性手套操作。

實驗結果展示