免疫熒光單標染色

免疫熒光染色是陝西依科生物特別推出的寬病理染色服務，免疫熒光染色是根據抗原抗體反應的原理，先將已知的抗原或抗體標記上熒光素製成熒光標記物，再用這種熒光抗體（或抗原）作為分子探針檢查細胞或組織內的相應抗原（或抗體）。免疫熒光染色主要是在細胞或組織中形成的抗原抗體複合物上含有熒光素，利用熒光顯微鏡觀察標本，熒光素受激發光的照射而發出明亮的熒光（黃綠色或桔紅色），可以看見熒光所在的細胞或組織，從而確定抗原或抗體的性質、定位，以及利用定量技術測定含量。

免疫熒光染色實驗原理

將不影響抗原抗體活性的熒光色素標記在抗體（或抗原）上，與其相應的抗原（或抗體）結合後，在熒光顯微鏡下呈現一種特異性熒光反應。

一、免疫熒光單標染色詳情介紹：

免疫學的基本反應是抗原-抗體反應。由於抗原體反應具有高度的特異性，所以當抗原抗體發生反應時，隻要知道其中的一個因素，就可以查出另一個因素。免疫熒光技術就是將不影響抗原抗體活性的熒光色素標記在抗體（或抗原）上，與其相應的抗原（或抗體）結合後，在熒光顯微鏡下呈現一種特異性熒光反應。

二、免疫熒光單標染色圖片

1. 細胞cd206

2.腦組織GFAP

(1)DAPI

(2) GFAP

(3） Merge

三、 實驗流程：

1. 石蠟切片脫蠟至水：依次將切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-無水乙醇Ⅰ5min-

無水乙醇Ⅱ5min-75%酒精 5min，自來水洗；

2. 抗原修複：組織切片置於盛滿檸檬酸（PH6.0)抗原修複液的高壓鍋內進行抗原修

複，噴氣計時2.5min， 自然冷卻後將玻片置於 PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃

動洗滌3 次，每次 5min；

3. BSA 或者血清封閉:切片稍甩幹後用組化筆在組織周圍畫圈（防止抗體流走），在圈內滴

加用5%BSA，室溫封閉 1h；

4. 加一抗：輕輕甩掉封閉液，在切片上滴加按一定比例配好的一抗，切片平放於濕盒內4°C

孵育過夜（濕盒內加少量水防止抗體蒸發）；

5. 加二抗：玻片置於PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌 3 次，每次8min。切片稍甩

幹後在圈內滴加與種屬對應的二抗，覆蓋組織，室溫孵育120min。之後玻片置於 PBS

（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌 3 次，每次 8min；

6. DAPI 染核：滴加DAPI，室溫孵育10min，之後玻片置於PBS（PH7.4）中在脫色搖床上

晃動洗滌3 次，每次 6min；

7. 封片：抗熒光淬滅劑封片；

8. 鏡檢拍照：切片於熒光顯微鏡下觀察並采集圖像。（DAPI 紫外激發波長330-380nm，發射波

長420nm，發藍光；FITC激發波長465-495nm，發射波長515-555 nm，發綠光；CY3激發波長

510-560，發射波長590nm，發紅光）。

四、染色結果判讀：DAPI染出來的細胞核在紫外的激發下為藍色，陽性表達為相應熒光素標記的紅

光或者綠光