冰凍包埋

冰凍包埋需要用到的實驗器材有:液氮、錫箔紙、冰凍切片包埋劑OCT、鑷子。

冰凍包埋實驗步驟:

1、取材當天把所需要包埋的組織放入4%多聚甲醛過夜；

2、將包埋筐放入15%蔗糖溶液過夜(4'C存放)，再將包埋筐放入30%蔗糖溶液過夜(4C存放)；

3、“沉糖”完成後，可進行冰凍包埋；

4、將包埋組織放於托盤中(托盤用錫箔紙包裹)；

5、將托盤放入液氮中，浸沒組織，持續3-5s後撈出，如此重複3-4次左右，待腦組織從半透明變為白色即可(組織浸沒與液氮的時間不能過長，避免組織碎裂）；

6、組織經液氮速凍後立即用錫箔紙包裹(標注實驗編號)，放入-80°C；

7、切片之前30min將組織從-80°C冰箱中取出，放入-20C冰箱中解凍；

8、解凍後用OCT膠包埋組織(包埋時確保需要切片的那一麵朝上) 放入冰凍包埋機中，20min左右後即可切片。